2024年1月31日，FDA正式发布 “Considerations for the Development of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cell Products”，为CAR-T细胞产品的开发提供了化学、制造和控制（CMC）、药理学和毒理学以及肿瘤适应症（包括血液系统恶性肿瘤和实体瘤）临床研究设计的相关建议。

CAR-T 细胞制造涉及多种生物物料和复杂的多步骤程序，这些因素都是产品批间差异的潜在来源。因此，生产过程的控制以及适当的中间和批次放行检测对于确保 CAR-T 细胞的安全性、质量和批间一致性至关重要。本期我们聚焦FDA最新版指南，深度解读CAR-T 细胞产品CMC阶段的五大注意事项！

为了促进CAR-T细胞批次间的一致性，FDA建议对生产工艺进行良好控制，可以通过使用优质材料、CPP的过程中控制、过程中测试以及CQA中间体和最终产品的测试来实现。FDA建议人类或动物源性成分进行适当的外源性检测。

在当前良好生产规范（CGMP）条件下，应使用经验证的无菌工艺进行生产。IND应证明通过开发或工艺批次生产，按照拟定的制造工艺生产CAR-T细胞的能力，进一步支持产品安全性。一般来说，来自健康捐赠者的起始材料适用于生产工艺开发批次；当使用患者来源的起始材料时，可能建议对自体CAR-T细胞进行额外的生产工艺开发。CAR T细胞的过程中测试方案通常评估多个参数（例如，活力、细胞数量、细胞表型、CAR表达）。FDA建议对CAR T细胞进行稳定性研究，以支持2020年1月指南“GT CMC指南V.A.7和V.B.8”中所述的保持和储存时间。另外，生产设备的运行参数应验证以支持BLA。

CAR-T细胞分析检测

对CAR-T细胞的分析检测，目的在于确保产品的安全性、特性、质量、纯度和强度（包括效力）。在2020年1月指南“GT CMC指南V.A.4和V.B.5”提供了Drug Substance (DS)和Drug Product (DP)分析测试的一般建议。V.A.4.b.i包括药典测试替代方法的建议。V.A.5.b.i包括对新鲜制备细胞产品的建议，或在最终配方和患者给药之间有限保持时间内使用的细胞产品的建议。

 CAR-T细胞的标签

IND产品必须贴上标签，并注明“警告：新药——受美国法律限制用于研究用途”。FDA建议标签包括产品名称、制造商信息以及“请勿过滤”和“请勿辐照”警告。用自体起始材料制造的CAR-T细胞必须贴上“仅供自体使用”的标签。根据对自体起始材料进行的供体检测和筛查，自体CAR-T细胞的标签必须注明“未评估感染性物质”，除非已根据21 CFR 1271.75、21 CFR 1271.80和21 CFR 1271.85（21 CFR 1271.90(c)(2)）进行了所有其他适用的筛查和检测。如果进行的筛查或测试结果表明存在相关传染病病原体和/或相关风险因素或临床证据，则CAR T细胞也必须贴上21 CFR 1271.3(h)中所示的生物危害图例。如果CAR-T细胞表达多个转基因元件，则效价测定应测量每个功能元件的活性。

▉ CAR-T细胞产品生命周期内生产变更管理和可比性评估

CAR-T细胞产品生命周期中的变化，包括最终容器、培养过程中使用的细胞因子或细胞扩增持续时间的变化，都可能会影响产品质量、安全性、功效或稳定性，FDA建议申请人在考虑此类变更时与OTAT沟通。

在规划此类变更时，一般建议申请人考虑以下事项：

1）载体生产过程的重大变化（例如，从贴壁培养到悬浮培养）应得到可比性研究的支持，评估此类变更对载体和CAR-T细胞的影响，应包括对变化前后载体的并行分析。

2）对于培养基中生长因子或添加物浓度或类型的变化，应进行更稳健的可比性研究。

3）当CAR-T细胞或载体生产设施发生变化时，应建立生产设施之间的可比性。

变更管理

关键实施及产品开发阶段变更，应进行风险评估，该风险评估应告知是否需要进行分析性可比性研究。FDA建议在启动可比性研究或实施变更之前，将拟议变更的细节、伴随的风险评估和拟议变更管理策略作为修订提交到IND，建议申请人与OTAT讨论研究设计和验收标准。可根据ICH Q5E中描述的一般原则，评估CAR-T细胞变化前后的分析可比性。

如果没有足够的证据证明分析的可比性，则可能需要进行新的非临床或临床研究，这可能会推迟产品批准。如果开发后期变更，且没有支持BLA的额外临床研究计划，则分析可比性研究应与批准产品进行的研究一样全面和彻底。

可比性研究设计

FDA建议，拟议的分析方法适用于检测变更对产品安全性和有效性的潜在影响。用拟议变更生产的产品能满足当前放行标准的证明通常不足以建立可比性。应使用适当的统计方法和预定义的验收标准进行分析。进行批次放行测试的属性外，还应使用可靠的分析方法监测各种产品属性，包括细胞表面标记。

由于自体CAR-T细胞的细胞起始材料固有的变异性，使用历史批次来评估可比性可能不够。FDA建议尽可能使用相同的细胞起始材料，通过并行测试来评估CAR-T细胞的可比性。如使用来自健康供体的CAR T细胞进行可比性研究，当健康供体生产的产品不足以评估自体CAR-T细胞的产品可比性，可比性研究还应包括对由患者细胞起始材料生产的CAR T细胞的评估。

▉ 单中心或多中心生产

单点生产

收集细胞起始材料，并将其运送集中生产点生产CAR T细胞。CAR-T细胞随后被运送到本地或远程临床地点进行给药。单点生产可能降低因设施之间差异而产生的产品可变性。

多中心生产

多中心生产可以缩短从细胞起始材料收集到自体产品给药时间；然而，制造设施之间差异可能会导致产品可变性，申请人应该证明在每个中心生产的产品有可比性，以支持临床试验结果分析。FDA建议在可能的情况下，在整个生产设施中使用相同的标准操作程序（SOP）、培训、试剂和设备，还建议IND描述各生产场所制造过程中的任何差异。FDA建议提交数据，最好是来自使用相同细胞起始材料在每个中心进行鉴定，以证明每个中心生产的产品的分析可比性，包括用于测试的方法列表和用于确定分析可比性的预定义验收标准。

多中心测试

FDA建议使用分析转移方案以确保在每个测试点进行的非药典试验适用于预期目的，并且在所有测试间可重复, 例如，流式细胞术。FDA建议在可能的情况下，在测试点中使用相同的SOP、试剂和设备。