新品速递 限时半价 C0050  BCA蛋白浓度测定试剂盒

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Ø 产品描述：

BCA（Bicinchoninic acid）是应用最广泛的蛋白浓度测定方法，常用于蛋白提取后的定量检测，具有操作简单、稳定性好、灵敏度高和兼容性高等优势。

BCA蛋白浓度测定试剂盒的检测原理涉及两步化学反应，第一步基于双缩脲反应，在碱性环境下蛋白质与二价铜离子络合并将二价铜离子还原为一价铜离子，形成蓝色复合物。第二步是BCA与一价铜离子结合形成稳定的蓝紫色复合物，该复合物在562 nm处有较高的吸光值，并与蛋白质浓度呈正比。

Ø 包装清单：

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Ø 产品特点：

1. 灵敏度高：最小检测蛋白量达到0.5 μg，检测浓度下限达到25 μg/mL，待测样品体积为1-20 μL。

2. 线性范围广：在25-2000 μg/mL浓度范围内有较好的线性关系。

3. 操作简单：正常情况下可在45分钟内完成测定，比经典Lowry方法速度快四倍。

4. 兼容性好：BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，DTT低于1mM，β-Mercaptoethanol低于0.01%。

Ø 操作说明：

1. 蛋白标准品和待测样品的准备

1) 向一管30 mg的BSA蛋白标准品中加入1.2 mL蛋白标准品配制液，充分溶解后配制成25 mg/mL的蛋白标准品溶液。配制后储存于-20°C。

2) 取适量25 mg/mL的蛋白标准品溶液，用蛋白稀释液稀释至终浓度0.5 mg/mL。可长期储存于-20℃。

注：待测蛋白样品在什么溶液中，蛋白稀释液也宜为相同溶液。也可以用0.9% NaCl或PBS作蛋白稀释液。

3) 将0.5 mg/mL的蛋白标准品溶液，按0、1、2、4、8、12、16、20 μL加到96孔板的标准品孔中，再分别加蛋白稀释液补足至20 μL，相当于蛋白标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4，0.5 mg/mL。

4) 加适当体积待测样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足20 μL，需加蛋白稀释液补足到20 μL。

2. BCA工作液配制

根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5 mL BCA试剂A加100 μL BCA试剂B，混匀，配制成5.1 mL BCA工作液。BCA工作液室温24小时内稳定。

3. 蛋白浓度测定

1) 各孔加入200 μL BCA工作液， 60℃放置30分钟。

注：BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。注意保持定时和定温，以确保精确定量。

2) 用酶标仪测定562 nm波长的吸光度。

3) 根据BSA标准品的吸光度，绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/mL；Y-A562）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

Ø 不同品牌 BCA 试剂盒的标准曲线对⽐

Ø 保存条件

试剂盒中的A、B液及蛋白标准品配制液室温保存。蛋白标准品（BSA）粉末室温保存，配成溶液后可置于-20℃保存一年。

Ø 注意事项

1. 本方法适合用于96孔板使用酶标仪检测。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液和标准品、样品的用量。

2. 低温或长期保存时，若发现试剂A或试剂B有沉淀，请37ºC温育并搅拌使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。

3. 建议每次测定都做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。