《荧光PCR技术常见困扰专题》进入第三篇，继之前的污染和交叉后，本期我们谈谈qPCR实验的又一个重要影响因素：抑制物。

荧光PCR的主要功能性成分为DNA聚合酶，常用的为Taq DNA聚合酶。该酶具有5'-3'端DNA聚合酶功能和3'-5'核酸外切酶活性，此外Taq酶还需要有Mg2+作为辅助因子激活。一些常见的生物体液样本、细胞/细菌培养液、疫苗/蛋白/酶发酵液等样本含有大量的杂蛋白、无机盐和其他化学试剂。这些试剂如果作为待检测样本，如果无法将上述抑制物去除，轻则会导致曲线异常，重则会呈现假阴性结果。

被抑制的阳性扩增曲线和阴性扩增曲线如图1和图2所示，图3是一个无抑制的阳性扩增曲线。图1和图2显示了一个共同的特点就是基线期不平滑且有扩增后期上扬（非正常扩增）的情况出现。

▲ 图1 | 被抑制的阳性扩增曲线

▲ 图2 | 被抑制的阴性扩增曲线

▲ 图3 | 无抑制的阳性扩增曲线

｜常见的荧光PCR抑制物有哪些？

｜如何解决抑制问题？